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Zeta Life 轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染raw 264.7細(xì)胞如何提高轉(zhuǎn)染效率
更新時(shí)間:2020-03-26   點(diǎn)擊次數(shù):1315次

用試劑轉(zhuǎn)染raw 264.7細(xì)胞怎樣提高轉(zhuǎn)染效率一直是困擾實(shí)驗(yàn)者的一道難題,特別對(duì)于10000左右質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)染更是困難;我們實(shí)驗(yàn)室總結(jié)了用Zeta Life公司Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑貨號(hào)AD600025轉(zhuǎn)染raw 264.7細(xì)胞一套優(yōu)化方案希望對(duì)大家轉(zhuǎn)染raw 264.7細(xì)胞提高轉(zhuǎn)染效率有一定的幫助。

下圖是8000bp左右的pEGFP-C1在6孔板用Zeta Life Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染raw 264.7細(xì)胞的熒光和細(xì)胞明場(chǎng)圖片。

 

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提高轉(zhuǎn)染raw 264.7細(xì)胞條件如下

一、質(zhì)粒DNA準(zhǔn)備

1、質(zhì)粒DNA濃度700ng/ul(注意:①溶解于無(wú)菌雙蒸水或超純水;②無(wú)內(nèi)毒素),我用QIAGEN試劑盒除去的內(nèi)毒素

二、操作流程

1、先將細(xì)胞接種到細(xì)胞培養(yǎng)板,細(xì)胞匯合度在70%左右,再進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

2、復(fù)合物制備:將質(zhì)粒DNA與Zeta Life Advanced Transfection Reagent貨號(hào)AD600025轉(zhuǎn)染試劑按照1:1(12ug:12ul)關(guān)系直接混合,用移液器吹吸10-15次混勻,室溫靜止10-15分鐘。

3、將復(fù)合物加入*培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)板,并輕輕混勻,放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)(不建議把復(fù)合物加入到無(wú)血清的培養(yǎng)基里面,我后期會(huì)進(jìn)一步摸索此條件)。

4、轉(zhuǎn)染24小時(shí)后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行正常換液。

5、質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染48小時(shí)后熒光檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率

三、注意事項(xiàng):

1本轉(zhuǎn)染方法不適用在下面轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染如:lipo3000、,FuGENE 6、FuGENE HD、Effectene等;

2細(xì)胞培養(yǎng)基:Zeta Life公司 z7181-500胎牛血清,Gibco公司DMEM;

四、美國(guó)Zeta Life Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑信息:

產(chǎn)品名稱

貨號(hào)

規(guī)格

數(shù)量

報(bào)價(jià)

Advanced DNA RNA 轉(zhuǎn)染試劑

AD600025

0.25ML

1

1590

Advanced DNA RNA 轉(zhuǎn)染試劑

AD600050

0.5

1

2390

Advanced DNA RNA 轉(zhuǎn)染試劑

AD600075

0.75

1

2890

Advanced DNA RNA 轉(zhuǎn)染試劑

AD600150

1.5ML

1

4490

Advanced DNA RNA 轉(zhuǎn)染試劑

AD600500

5ML

1

電詢

Advanced DNA RNA 轉(zhuǎn)染試劑

AD601000

10ML

1

電詢

五、RAW 264.7細(xì)胞簡(jiǎn)述:

RAW 264.7小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞. 此細(xì)胞株源自雄性Abelson鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤。 sIg-, Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原陰性。此細(xì)胞株不分泌可檢測(cè)到的病毒顆粒,XC斑點(diǎn)形成試驗(yàn)陰性。 可以胞飲中性紅并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖。 可以抗體依賴性地分解綿羊紅血球與腫瘤靶細(xì)胞。

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