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細(xì)胞周期檢測(cè)實(shí)驗(yàn)介紹
更新時(shí)間:2022-08-17   點(diǎn)擊次數(shù):615次


技術(shù)原理

細(xì)胞周期分為間期與分裂期兩個(gè)階段。間期又分為三期:即DNA合成期(G1期)、DNA合成期(S期)與DNA合成后期(G2期)。某些細(xì)胞在分裂結(jié)束后暫時(shí)離開細(xì)胞周期,停止細(xì)胞分裂,執(zhí)行一定生物學(xué)功能(G0期)。由于細(xì)胞周期各時(shí)相的DNA含量不同,通常正常細(xì)胞的G1/ G0期具有二倍體細(xì)胞的DNA含量(2N),而G2/ M期具有四倍體細(xì)胞的DNA含量(4N),而S期的DNA含量介于二倍體和四倍體之間。 PI可以與DNA結(jié)合,其熒光強(qiáng)度直接反映了細(xì)胞內(nèi)DNA含量。因此,通過流式細(xì)胞儀PI染色法對(duì)細(xì)胞內(nèi)DNA含量進(jìn)行檢測(cè)時(shí),可以將細(xì)胞周期各時(shí)相區(qū)分為G1/G0期,S期和G2/M期。

PI為插入性核酸熒光染料,能選擇性的嵌入核酸DNA和RNA雙鏈螺旋的堿基之間與之結(jié)合,其結(jié)合的量與DNA的含量成正比例關(guān)系,用流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析,就可以得到細(xì)胞周期各個(gè)階段的DNA分布狀態(tài),從而計(jì)算出各個(gè)期的百分含量。

實(shí)驗(yàn)方法

Step1:細(xì)胞培養(yǎng)

Step2:轉(zhuǎn)染或藥物處理

Step3:細(xì)胞收集

Step4:加周期試劑

Step5:上機(jī)檢測(cè)

案例展示

在施加藥物后,細(xì)胞周期明顯阻滯。

技術(shù)總結(jié)

1、考慮到進(jìn)行流式時(shí)需要用到對(duì)照組細(xì)胞設(shè)置空白組(用于調(diào)節(jié)電壓)和單染組細(xì)胞(用于調(diào)節(jié)補(bǔ)償),因此要求該組細(xì)胞量較其他組多;

2、如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞密度偏低,細(xì)胞量較少,則適當(dāng)增加離心時(shí)間。收集細(xì)胞時(shí),應(yīng)該連同上清一起收集,同時(shí)胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng),否則容易引起假陽性;

3、檢測(cè)細(xì)胞經(jīng)過轉(zhuǎn)染等處理后可能會(huì)帶有自發(fā)熒光,應(yīng)注意選擇試劑盒的顏色通道 如:帶綠色熒光時(shí),應(yīng)選擇紅光試劑盒;

4、細(xì)胞鋪板應(yīng)選擇細(xì)胞狀態(tài)良好的時(shí)候進(jìn)行,且避免因反復(fù)吹打形成機(jī)械損傷,而出現(xiàn)細(xì)胞碎片過多。

送檢與交付標(biāo)準(zhǔn)


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