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細(xì)胞培養(yǎng)實驗原理介紹
更新時間:2022-08-18   點擊次數(shù):932次

 細(xì)胞培養(yǎng)


從體內(nèi)組織取出細(xì)胞,在體外培養(yǎng)使其生長繁殖并維持其結(jié)構(gòu)和功能的一種培養(yǎng)技術(shù)。

 

細(xì)胞培養(yǎng)的意義


1. 是細(xì)胞生物學(xué)研究中基礎(chǔ)、基本的一項技術(shù),可以用來進(jìn)行藥物篩選、疫苗生產(chǎn)、抗體制備等。

2. 可以模擬復(fù)雜的生命活動機制 in vitro(體外)-in vivo(體內(nèi))。主要是大部分實驗無法把活體作為實驗對象,因此需要先在細(xì)胞水平進(jìn)行研究,再從體內(nèi)進(jìn)行驗證。

3. 可以通過細(xì)胞培養(yǎng)獲得大量實驗細(xì)胞,進(jìn)而研究實驗細(xì)胞的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、物質(zhì)及能量代謝以及細(xì)胞的增殖凋亡等。

 

常見細(xì)胞培養(yǎng)類型


1. 原代細(xì)胞培養(yǎng):

從生物體組織、器官中分離得到的原代細(xì)胞,通過機械方法、酶、螯合劑(如EDTA)來處理分散成單細(xì)胞,置于培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng),注意原代培養(yǎng)的貼壁依賴性細(xì)胞需要使用促進(jìn)貼壁的包被培養(yǎng)皿(如使用多聚賴氨酸),從而幫助細(xì)胞貼壁,促進(jìn)細(xì)胞的生長和增殖。。

 

2. 貼壁細(xì)胞培養(yǎng):

貼壁培養(yǎng)主要適用于貼壁依賴性的細(xì)胞,細(xì)胞貼附于培養(yǎng)皿的表面生長,當(dāng)生長鋪滿平面時會發(fā)生接觸抑制,此時就需要對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代方式也是采用酶消化法,可根據(jù)具體需要,選擇是否使用多聚賴氨酸鋪皿來促進(jìn)細(xì)胞貼壁生長。

 

3. 懸浮細(xì)胞培養(yǎng):

懸浮培養(yǎng)主要適用于非貼壁依賴性的細(xì)胞,細(xì)胞或者細(xì)胞的聚集體懸浮于培養(yǎng)液中,懸浮培養(yǎng)是一種大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)的理想方式。懸浮培養(yǎng)需要保持良好的分散狀態(tài),因此需要再振蕩的條件下培養(yǎng),形成分散良好的懸浮培養(yǎng)物。當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)至一定密度時需進(jìn)行傳代,傳代時需去除較大的細(xì)胞聚集體和殘渣物。

 

4. 干細(xì)胞的培養(yǎng):

干細(xì)胞具有自我更新和自我維持的能力,可以無限次地進(jìn)行增殖分裂,是一類尚未充分分化多潛能的細(xì)胞,在一定條件下,可以分化成多種功能細(xì)胞。根據(jù)干細(xì)胞的類型選擇貼壁培養(yǎng)或懸浮培養(yǎng)的方式,通常干細(xì)胞生長于鋪有輔助附著的細(xì)胞外基質(zhì)的成分(如明膠、基質(zhì)膠或膠原蛋白等)或是MEF飼養(yǎng)層的培養(yǎng)皿上,除了這類傳統(tǒng)的二維培養(yǎng)技術(shù),還可以使用三維的培養(yǎng)技術(shù)來模擬生物機體內(nèi)環(huán)境,可根據(jù)不同的細(xì)胞類型來進(jìn)行培養(yǎng)條件的優(yōu)化和分析。

 

結(jié)果展示


細(xì)胞培養(yǎng)(圖1)                   細(xì)胞培養(yǎng)(圖2)

                                                                                  人肺動脈內(nèi)皮原代細(xì)胞                                                             人尿液原代細(xì)胞 

 

實驗完成周期及交付標(biāo)準(zhǔn)


1. 實驗周期:一般細(xì)胞培養(yǎng)時間為2-5天,特殊細(xì)胞培養(yǎng)根據(jù)細(xì)胞說明書而定。

2. 交付標(biāo)準(zhǔn):細(xì)胞圖片、實驗報告(試劑、耗材、實驗步驟)

 

需確認(rèn)的信息


1. 需要培養(yǎng)細(xì)胞的具體名稱?

2. 客戶是否提供細(xì)胞還是我方代購?

3. 細(xì)胞培養(yǎng)只是為本實驗獲得標(biāo)本,我們需要具體對細(xì)胞進(jìn)行哪些具體生物學(xué)功能檢測?如增殖、凋亡、遷移、侵襲等。


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